全自動(dòng)定氮儀使用過(guò)程中運(yùn)用到的化學(xué)公式
目前測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法有很多種,常見(jiàn)的有全自動(dòng)定氮儀法、紫外吸收法、雙縮脲法、考馬斯亮藍(lán)法和質(zhì)譜法等。有報(bào)道紫外吸收法無(wú)法測(cè)出牛奶、酸奶的蛋白含量,測(cè)出的豆?jié){蛋白含量也與實(shí)際值相差較大,不具實(shí)際使用價(jià)值。雙縮脲法是傳統(tǒng)的分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)的方法,準(zhǔn)確度好,精密度好,呈色穩(wěn)定性好,試劑單一,方法簡(jiǎn)便,但靈敏度不高,約為1mg,故現(xiàn)在已很少使用??捡R斯亮藍(lán)染色法快速、靈敏,但只有作微量蛋白測(cè)定時(shí)的結(jié)果才準(zhǔn)確,因此在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)將樣品稀釋至蛋白
定氮儀,也就是全自動(dòng)定氮儀,包括消化爐和蒸餾裝置。消化爐的功能主要是對(duì)樣品進(jìn)行消化,消化主要是通過(guò)這個(gè)化學(xué)過(guò)程來(lái)完成的:2NH2 (CH2) 2COOH + 13H2SO4 =(NH4 ) 2SO4 + CO2↑ + SO2↑+ 16H2O。消化完成后就進(jìn)入蒸餾環(huán)節(jié)。蒸餾是指在樣品中加入濃氫氧化鈉,然后加熱放出氨氣的過(guò)程,其反應(yīng)式如下:NaOH + (NH3) 2SO4 = 2NH3↑ + Na2SO4 + H2O。蒸餾完成后就是吸收和滴定,其過(guò)程為:2NH34H2BO3 = (NH4) 2B4O7 + 5H2O(吸收)、(NH4) 2B4O7 + 5H2O + 2HCl = 2NH4Cl + 4H3BO3(滴定)。
以上四個(gè)過(guò)程,蛋白質(zhì)測(cè)定儀可以在兩種模式下完成,分別為自動(dòng)模式和手動(dòng)模式。自動(dòng)模式即一次完成加堿、加硼酸、蒸餾、氨氣吸收整個(gè)過(guò)程,不需人工操作,全由程序控制完成。而手動(dòng)模式即加硼酸、加堿、氨氣吸收三個(gè)過(guò)程單獨(dú)操作,人為控制其時(shí)間。每種模式都有其優(yōu)勢(shì),不可一概而論。粗蛋白測(cè)定儀有多種型號(hào),如KDN-04A,KDN-04C,KDN-08A,KDN-08C,不同的型號(hào)最大的區(qū)別就是消化爐的孔數(shù),有4孔、8、12、20孔不等。蛋白質(zhì)測(cè)定儀測(cè)定范圍為0.1mgN~200mgN(毫克氮)(含氮量0.02% ~ 95%);回收率為100±1%;蒸餾速度為<5分鐘/樣品;冷卻水消耗為2L/分鐘;重復(fù)率:相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差<±1%。
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