實(shí)驗(yàn)原理及目的染色質(zhì)免疫共沉淀(ChromatinImmunoprecipitation,ChIP)是目前研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用最為主要的方法之一。本實(shí)驗(yàn)的原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下通過化學(xué)交聯(lián)劑將蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物固定,并將其隨機(jī)打斷成一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片疋段,然后通過免疫學(xué)的方法沉淀出目的蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合體,從而特異性地富集與目的蛋白相結(jié)合的DNA片段。通過對(duì)目的DNA片斷的純化與檢測(cè),最終獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)廣泛的應(yīng)用于表觀遺傳(組蛋白等)分析,轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)分析等蛋白質(zhì)與DNA結(jié)合的試驗(yàn)分析中。隨著第二代測(cè)序技術(shù)的逐步完善和成熟,染色質(zhì)免疫共沉淀結(jié)合第二代高通量測(cè)序技術(shù)(ChIP-seq)正逐步成為基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)研究中一種非常有效的研究手段。實(shí)驗(yàn)步驟A]實(shí)驗(yàn)材料的交聯(lián)處理(室溫):B]實(shí)驗(yàn)材料的染色質(zhì)抽提(4度):C]染色質(zhì)的超聲波片段化(4度):D]染色質(zhì)前處理和免疫共沉淀(4度):孵育抗體和磁珠染色質(zhì)的預(yù)處理免疫沉淀E]洗脫蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物并釋放DNA(4度):F]純化DNA(室溫):G]對(duì)ChIPDNA進(jìn)行定量:結(jié)果分析:%Input=2(CtInput-CtChIP)×Fd×100%;FoldEnrichment=[%(ChIP/Input)]/[%(Negativecontrol/Input)]服務(wù)周期20個(gè)工作日材料條件實(shí)驗(yàn)材料:ChIP級(jí)饣抗體,5ug/樣本;細(xì)胞:大于107;動(dòng)物組織:大于0.1g/樣本;植物組織:5g/樣本。交付結(jié)果實(shí)驗(yàn)報(bào)告(實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備、試劑、實(shí)驗(yàn)方法、數(shù)據(jù)分析結(jié)果);實(shí)驗(yàn)原理及目的染色質(zhì)免疫共沉淀(ChromatinImmunoprecipitation,ChIP)是目前研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用最為主要的方法之一。本實(shí)驗(yàn)的原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下通過化學(xué)交聯(lián)劑將蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物固定,并將其隨機(jī)打斷成一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段,然后通過免疫學(xué)的方法沉淀出目的蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合體,從而特異性地富集與目的蛋白相結(jié)合的DNA片段。通過對(duì)目的DNA片斷的純化與檢測(cè),西安淳風(fēng)生物科技有限公司,淳風(fēng)生物科技,最終獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)廣泛的應(yīng)用于表觀遺傳(組蛋白等)分析,轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)分析等蛋白質(zhì)與DNA結(jié)合的試驗(yàn)分析中。隨著第二代測(cè)序技術(shù)的逐步完善和成熟,染色質(zhì)免疫共沉淀結(jié)合第二代高通量測(cè)序技術(shù)(ChIP-seq)正逐步成為基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)研究中一種非常有效的研究手段。實(shí)驗(yàn)步驟A]實(shí)驗(yàn)材料的交聯(lián)處理(室溫):B]實(shí)驗(yàn)材料的染色質(zhì)抽提(4度):C]染色質(zhì)的超聲波片段化(4度):D]染色質(zhì)前處理和免疫共沉淀(4度):孵育抗體和磁珠染色質(zhì)的預(yù)處理免疫沉淀E]洗脫蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物并釋放DNA(4度):F]純化DNA(室溫):G]對(duì)ChIPDNA進(jìn)行定量:結(jié)果分析:%Input=2(CtInput-CtChIP)×Fd×100%;FoldEnrichment=[%(ChIP/Input)]/[%(Negativecontrol/Input)]服務(wù)周期20個(gè)工作日材料條件實(shí)驗(yàn)材料:ChIP級(jí)抗體,5ug/樣本;細(xì)胞:大于107;動(dòng)物組織:大于0.1g/樣本;植物組織:5g/樣本。交付結(jié)果實(shí)驗(yàn)報(bào)告(實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備、試劑、實(shí)驗(yàn)方法、數(shù)據(jù)分析結(jié)果);實(shí)驗(yàn)原理及目的染色質(zhì)免疫共沉淀(ChromatinImmunoprecipitation,ChIP)是目前研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用最為主要的方法之一。本實(shí)驗(yàn)的原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下通過化學(xué)交聯(lián)劑將蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物固定,并將其隨機(jī)打斷成一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段,染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)外包,然后通過免疫學(xué)的方法沉淀出目的蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合體,從而特異性地富集與目的蛋白相結(jié)合的DNA片段。通過對(duì)目的DNA片斷的純化與檢測(cè),最終獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)廣泛的應(yīng)用于表觀遺傳(組蛋白等)分析,染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)外包,轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)分析等蛋白質(zhì)與DNA結(jié)合的試驗(yàn)分析中。隨著第二代測(cè)序技術(shù)的逐步完善和成熟,染色質(zhì)免疫共沉淀結(jié)合第二代高通量測(cè)序技術(shù)(ChIP-seq)正逐步成為基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)研究中一種非常有效的研究手段。實(shí)驗(yàn)步驟A]實(shí)驗(yàn)材料的交聯(lián)處理(室溫):B]實(shí)驗(yàn)材料的染色質(zhì)抽提(4度):C]染色質(zhì)的超聲波片段化(4度):D]染色質(zhì)前處理和免疫共沉淀(4度):孵育抗體和磁珠染色質(zhì)的預(yù)處理免疫沉淀E]洗脫蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物并釋放DNA(4度):F]純化DNA(室溫):G]對(duì)ChIPDNA進(jìn)行定量:結(jié)果分析:%Input=2(CtInput-CtChIP)×Fd×100%;FoldEnrichment=[%(ChIP/Input)]/[%(Negativecontrol/Input)]服務(wù)周期20個(gè)工作日材料條件實(shí)驗(yàn)材料:ChIP級(jí)抗體,5ug/樣本;細(xì)胞:大于107;動(dòng)物組織:大于0.1g/樣本;植物組織:5g/樣本。交付結(jié)果實(shí)驗(yàn)報(bào)告(實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備、試劑、實(shí)驗(yàn)方法、數(shù)據(jù)分析結(jié)果);.淳風(fēng)生物科技///染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)外包
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